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Agilent Technologies提供之實驗設計

XF Cell Mito Stress Test

起始先偵測基礎的耗氧狀況,先加入ATP synthase inhibitor抑制粒線體產生ATP,被抑制的耗氧量就表示有多少氧氣參與合成ATP,接著加入FCCP,此藥物為uncoupler在適當的濃度可不破壞電子傳遞鏈而讓粒線體以極限狀況空轉,用以評估粒線體的最大耗氧能力,最後加入電子傳遞鏈的抑制劑Complex I inhibitor Rotenone & complex III inhibitor Antimycin A,將粒線體的耗氧完全關閉,確定其偵測的背景值。

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XF Glycolysis Stress Test

上機前須先將培養基更換為no glucose medium 30 min,將細胞內的glucose消耗完,因此一開始偵測時ECAR數值會很低,因為沒有glucose可進行glycolysis;首先加入10 mM glucose,評估樣本在環境突然給與足夠養分時將之轉換的效率,接著加入oligomycin關閉粒線體的ATP供應,評估當糖解作用為唯一ATP來源時的表現狀況,最後加入2-DeoxyGlucose來競爭glucose以確定糖解作用的背景值。

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