成大醫院臨床醫學研究中心電子報         

 第四期 2022.12.

專家經驗分享

研究服務公告

主題介紹

臨醫中心活動公告

核心/共同實驗室教育訓練課程

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研究服務公告

藥物研發核心實驗室                              

   藥物研發核心實驗室的主要致力於癌症藥物及奈米藥物的開發。此外本實驗室也擔任支援研究之任務，負責高效液相層析儀 High-performance Liquid Chromatography (HPLC)之管理、諮詢及維護工作。高效液相層析是定性和定量分析中最為常用的分析方法之一，同時對多種溶質成分的樣本進行快速且同步的定性和定量分析，採用自動進樣器之分析值具有很高的再現性，樣本量從微升(μL)的量級開始，搭配兩種光學檢測器(紫外光及螢光)通用於多數目標化合物，分析級收集器可進行化合物純化，是廣泛應用於各種科學領域和產業的分析手法。生科研發領域常見應用於藥物開發之純度檢測、奈米藥物包覆測試、藥物動力分析(小動物組織之藥物及代謝物濃度)、中草藥成分分析(有效成分含量)、代謝組學之激素或生物標記物等。

聯絡資訊：

顧問研究員：蘇五洲 教授 (分機3107)

技術諮詢：葉宣亨 博士 (分機3120)

技術員：杜怡蕙 小姐 (分機6728)；tuihui.ncku@gmail.com

主題介紹

不同於第一期介紹的快速蛋白質液相層析系統(FPLC)以純化大量蛋白質為其應用，本期的主題高效液相層析儀(HPLC)則著重於液態樣品成分之定性和定量分析，亦可進行少量的純化成分回收，中心的藥物研發核心實驗室提供HPLC供同仁自行操作使用，歡迎大家向其諮詢討論並預約使用。

下一期電子報主題為全景組織細胞分析儀，將組織切片影像數位化，以高解析度完美拼接，並結合細胞辨識科技和類流式細胞儀的分析模式用以得到組織細胞的定量資訊，將可提供更精確可靠的研究分析與病理診斷。敬請期待。

高效液相層析儀(High Performance Liquid Chromatography, HPLC) ：

巨研科技股份有限公司 技術服務部 協理 官燦奎先生

液相層析系統目前已是被廣泛使用的分析設備，它有非常強大的分離效率，可將樣品中的目標成分與基質分離，再進行成分的檢測或制備(純化)，為實驗中有需要確認檢體中藥物、蛋白質(胜肽)、游離胺基酸、維生素或是生物標記分子等的成分含量、或需要分離純化後再執行後續實驗，提供了一個可靠與便利的工具平台。目前臨醫中心有一套安捷倫1260 Infinity LC液相層析系統，配備完整，茲介紹其功能如下:

Agilent InfinityLab系列液相層析系統：1260 Infinity LC

液相層析系統一般包含Pump (幫浦)、Autosampler (自動進樣器)、Column oven (柱溫箱)及Detector (偵測器)。Agilent 1260 Infinity系列提供了完整的液相層析服務(如圖一)，具600 bar的標準幫浦壓力並搭配80 Hz標準檢測器收集速率，可分析常規HPLC方法，也能支援2.1、3.0及4.6 mm內徑柱的LC。

圖一

       Agilent 1260 Infinity的G1312B Binary pump透過內部兩顆計量幫浦來控制移動相流量並進行高壓混合，提供連續、穩定、精確的移動相流量攜帶樣品向前推進，該泵能輸送0.001至5 ml/min的流速範圍，提供了精準且彈性的梯度條件設定。分析的過程始於樣品透過高性能自動進樣器被導入液相層析系統中，且進樣後樣品殘留量低於0.004%以下。在自動進樣器下方搭載Agilent恆溫樣品盤G1330B，使用半導體元件，利用珀爾帖效應（Peltier Effect）來進行加熱及冷卻，其溫控範圍為4°C至40°C，以維持生物性樣品的穩定。樣品於管柱分離的過程中，溫度亦扮演著重要角色，Agilent 1260 Infinity G1316C柱溫箱中的熱交換器，亦使用半導體元件，將移動相進行加熱或冷卻後進入管柱，與此同時，內嵌於柱溫箱中的管柱則透過熱輻射跟熱對流的方式形成與熱交換器同樣的溫度，以維持分析穩定性。該款柱溫箱的溫控範圍從-10°C至100°C，並可放置三根30公分長的管柱。

HPLC中的偵測器作為一種轉換器，將化合物的物理性質或化學性質轉換為電子訊號，顯示在電腦數據站，讓分析人員可以進一步利用這些數據來鑑定樣品成分並定量濃度。Agilent 1260 Infinity G1314F可變波長偵測器(VWD)內建的氘燈提供190-600 nm的紫外光，並可於不同時間切換不同偵測波長，以達到更廣泛的應用。離開偵測器的樣品可以視需求選擇是否收集。Agilent 1260 Infinity G1364F分析級餾分收集器，適用於進行ng至mg級的化合物純化，其流速介於0.1和10 mL/min之間，內建的餾分延遲感測器可自動延遲校正以實現最大的物質回收率。

在HPLC中，根據層析圖中出現的峰值時間，以及其面積值，對分析物作出定性與定量分析。例如，在利用氧化石墨烯量子點奈米粒子處理抗壞血酸 (ascorbic acid)後，利用HPLC分析可以發現樣品中除了原先位於2.638分鐘位置的抗壞血酸的訊號之外，在2.295分鐘的位置出現了脫氫抗壞血酸(dehydroascorbic acid)的訊號(如圖二)，證實氧化石墨烯量子點奈米粒子可以攻擊抗壞血酸上的電子，對其進行氧化進而產生脫氫抗壞血酸，在帶入抗壞血酸及脫氫抗壞血酸標準品的檢量線後更能進行定量分析，計算其反應速率。同樣的分析方法除了可以用來分析各種奈米藥物的作用機轉，也可以用來分析各種藥物的代謝機制(衍生物產生)。

圖二

臨醫中心活動公告

【演講公告】2022年12月02日(五)12:00-13:00菁英計畫受補助者-職業及環境醫學部藍凡耘醫師返國後公開演講將於門診大樓七樓7027階梯教室舉行，講題為”踏出哈佛校門之後：知識份子的社會責任與實踐”，歡迎校內及院內同仁報名參與。(教學中心網站 https://educ.hosp.ncku.edu.tw/)

【數位課程公告】國科會計畫申請經驗分享座談會(第一、二場)，皆可登錄本院數位學習系統(https://elearning.hosp.ncku.edu.tw/Default.aspx)進行聽講!!

【數位課程公告】20221104 約翰霍普金斯大學_洪建夫教授演講，講題為”利用創新免疫技術來治療癌症(Innovative immunotherapies to treat cancers)”，即日起，可登錄本院數位學習系統進行聽講!!

【院內計畫公告】依據111年11月8日以成附醫臨醫字第1110023167號函公告，111年院內計畫經費應於111年12月5日前送達主計室辦理核銷，賸餘款不得保留繼續使用。經費核銷如有疑問，請洽主計室林小姐(分機4524)。

核心/共同實驗室教育訓練課程

近期儀器訓練課程:       

  臨醫中心網頁報名 (https://crc.hosp.ncku.edu.tw/index.php?modify=course)

12月15日       全景組織體細胞定量分析儀(TissueFaxs)實機操作示範與認證課程

12月20-22日   Olympus 自動正立式及倒立式螢光顯微鏡 (與醫學院核心實驗室合辦)

醫學院核心實驗室儀器訓練課程:

  醫學院核心實驗室網站報名 (https://corelab.med.ncku.edu.tw/index.php?modify=course)

     12月15日      快速同型同步定量偵測系統(StepOne Plus 96-well qPCR)

     12月20日       Olympus正/倒立式螢光顯微鏡 (與臨醫中心合辦)

     12月23日      流式細胞儀(Beckman CytoFLEX)

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