成大醫院臨床醫學研究中心電子報         

 第八期 2023.12.

研究服務公告

微生物診斷與抗藥性核心實驗室

    近來由於醫療技術的進步，許多身患重大疾病的病人得以延長存活期，但也增加了感染的風險，而且感染的微生物樣也越來越多樣化。本核心實驗室提供臨床感染症及微生物學的研究協助。利用實驗室的平台，即使非感染症專門的研究者也能從事感染症相關的檢驗與研究，不需重新學習及耗費資源自行設立研究平台。核心實驗室利用PCR以及基因定序，協助同仁判定困難培養、或一般微生物實驗室難以鑑定的細菌、黴菌和分枝桿菌。針對黴菌與分枝桿菌，核心實驗室亦提供標準化的藥物敏感性測試。此外，針對盛行率日益嚴重的抗藥性微生物，實驗室也提供合適的藥物敏感性檢驗方式以及抗藥性基因檢定，提供研究者選擇合適的治療藥物。

    「微生物診斷與抗藥性核心實驗室」提供院內外的研究服務，我們鼓勵院內研究者在提出計畫前，可與核心實驗室的顧問專家一同討論，設計合適的微生物相關實驗。過去我們曾經協助不同臨床單位，進行臨床檢體的採樣，以及分子生物鑑定，並將研究成果發表在聲譽卓著的科學期刊。希望提升成大醫學中心感染症疾病研究的水準。

 

主題介紹

    Luminex 200高通量多重因子螢光檢測系統，可以同時於單一樣本中偵測百種不同的生物分子目標(如蛋白質、核酸、細胞和微生物)，利用微珠編碼，以流式分析技術進行高通量且快速的定量或定性分析，應用於臨床與生命學研究。廠商專員提供實驗設計討論與協助上機服務，歡迎大家至中心免疫及細胞學核心實驗室預約使用。技術員: 楊高奇  醫事檢驗師 (分機4204)。儀器位址: 門診7樓07014室。

    下一期電子報主題將介紹細胞分選系統，依中心提供之服務設備分為兩期，首先登場為流式細胞分選儀，其次為全自動磁性細胞分選儀，敬請期待。

 

Luminex 200高通量多重因子螢光檢測系統的多樣應用 - 加速科學研究的利器

騰達行企業股份有限公司  產品專員  錢怡潔

導言

      在當今的生命科學研究和臨床診斷領域，高通量技術和多重分析工具變得越來越重要。瞭解蛋白質、核酸和其他生物分子的表現量對於疾病機制的研究和診斷至關重要。Luminex 200 系統以其先進的xMAP® 技術，搭配具市面上最多的蛋白分析標的Milliplex試劑結合，為研究人員和臨床實驗室提供了一個卓越的工具，用於高效率、多重分析和數據驅動的研究。

Luminex 200 機器和xMAP® 技術

        Luminex 200 是一種高通量流式細胞分析系統，常應用於生物學研究和臨床檢測。該系統的核心技術是xMAP®（多功能分析顆粒技術），可同時檢測多個生物分子，如蛋白質、核酸、細胞和微生物。xMAP® 專利技術是利用兩種不同濃度染劑組合出100種顏色微珠（Microspheres），將微珠進行1-100號編碼，每個微珠都有獨特的發光特性。利用微珠作為標識 ( Barcode )，搭配微磁珠表面上羧基基團來鍵結不同抗體、蛋白peptide 或oligo nucleotide或其他生物分子。

       結合流式細胞儀的技術，機器具備兩支雷射，透過紅雷射激發微珠，再利用兩組濾鏡過濾判讀發散光中兩種顏色強度，還原微珠色碼編號。接著透過綠雷射激發待測物PE螢光，再利用PMT收光，檢測器會記錄每個微珠的發光訊號，這樣便可以定性待測物是否存在。或是將得到螢光強度 (MFI) 搭配標準品拉出的標準曲線，即可用來定量每個生物分子的表現量，達到在一份檢體中同時偵測到100種不同的目標。 這種技術具有高度靈敏度、高通量、高度多重性和低檢測極限的優勢，使其成為各種生物學研究和臨床應用的首選工具。

 

微珠可以根據實驗需求偶聯特定的生物檢測目標，以下分為蛋白質研究與核酸研究兩大應用領域應用。

• xMAP®技術在蛋白質領域研究應用

       在蛋白質相關研究領域，包含抗體 ( Antibody ) - 抗原 ( Antigen )、配體 ( Ligand ) - 受體 ( Receptor ) 、酵素 ( Enzyme ) 與蛋白質交互作用等研究領域。

       以常見的免疫反應相關研究 ( 高通量ELISA ) 為例。其中以Merck的 Milliplex多重分析試劑做舉例，原理是分別將辨識不同待測物的抗體( Capture antibody ) 接在不同螢光比例的xMAP® 專利微珠上，與樣品進行反應後，接著與Detection antibody進行反應後，以Streptavidin-Phycoerythrin ( SA-PE ) 進行呈色。目前已可用於偵測多種生物物種，如: 人類、靈長類、大小鼠、貓、狗、豬、馬等物種。可檢測細胞因子、生長因子、激素、趨化因子、細胞受體、蛋白質、激酶等多種蛋白。此外，檢測檢體種類相當多元，除了常見的血清、血漿檢體之外，組織、細胞、培養基與各種體液 (關節液、肺泡、陰道灌洗液)等等皆不受限，以滿足不同研究需求，確保研究者能夠檢測其感興趣的研究領域中的生物標誌物。搭配卓越的偵測靈敏度，可以檢測到低濃度的生物分子，使其在生物標誌物的研究中至關重要。

• xMAP®技術在核酸領域研究應用

       xMAP®技術在核酸檢測應用中發揮了重要作用，包括基因檢測、基因分型 ( Genotyping )、核酸定量、單核苷酸多型性 ( SNP )、染色體拷貝數變異( CNV )、序列測定等多個方面。技術的靈活性和多功能性使其成為進行高通量核酸分析的理想選擇。以下是xMAP®技術在核酸檢測中的一些主要應用：

• 基因檢測：xMAP®技術可以用於單一核酸序列檢測，對於特定基因的檢測非常有用。可以將不同的核酸探針附著在不同的微珠上，每個探針專門檢測一個特定的基因序列。這樣，可以同時檢測多個基因，節省時間和成本。這對於遺傳疾病的診斷、基因表達研究以及基因突變的檢測都具有重要意義。
• 基因分型：將不同的核酸探針固定在不同螢光比例的微珠上，每個探針專門用於檢測一個特定的SNP位點或基因變異。這些核酸探針的序列是具有高度特異性，只會與目標核酸序列的特定變異部分結合。可以透過Luminex 200機器同時檢測多個不同SNP位點或基因變異，有助於瞭解遺傳多態性、個體差異和基因變異與疾病之間的關聯。

        xMAP®技術在蛋白質與核酸研究中提供了高效率、高靈敏度和高多重性的解決方案，使研究人員能夠更深入地研究蛋白、基因表達和遺傳多樣性。這對於生命科學研究、臨床診斷和環境研究都具有重要意義，並有望在未來的科學研究中發揮更廣泛的應用。

結論

        xMAP®技術和搭配已商業化產品的結合，能夠更廣泛、快速地應用在領域，使其成為當今生命科學和臨床診斷領域的一個不可或缺的工具。無論是在生物學研究、臨床診斷、生物製藥、環境監測還是其他領域，這項技術都提供了高效的多重分析解決方案，幫助研究人員和臨床醫生更好地了解生物分子，促進醫學和科學的進步。

臨醫中心活動公告

【核心實驗室公告】RNAi核心實驗室即日起恢復收件，有相關實驗需求者，歡迎申請代檢服務。技術員: 張頒育醫檢師 (分機6056)。

【核心實驗室公告】即日起修訂「微生物診斷與抗藥性核心實驗室」之服務項目及收費標準。

【儀器重要公告】本中心海馬生物能量測定儀將進行汰舊換新作業，已於112年3月中旬購入新型海馬生物能量測定儀(XFe24)，自即日起1年內新舊機同步開放使用，請持有舊機XF24專用耗材之實驗室把握時間將耗材使用完畢。

【數位課程公告】於11/4及11/18舉辦的國科會研究計畫撰寫與經驗分享課程(第一、二場)已圓滿落幕，錯過的同仁可登錄本院數位學習系統進行聽講!!

【院內計畫公告】依據112年10月30日以成附醫臨醫字第1120023308號函公告，112年院內計畫經費應於112年12月5日前送達主計室辦理核銷，賸餘款不得保留繼續使用。經費核銷如有疑問，請洽主計室石小姐(分機4524)。

【論文獎勵公告】依據112年10月26日以成附醫臨醫字第1120023059號函公告，自2024年1月1日起調整投稿於附件表列期刊論文獎勵發放金額，投稿於「類別二加強實質審查期刊名單」內之期刊者其論文獎勵發放金額為「論文獎勵金發放標準」核予減半(50%)之金額。

 

核心/共同實驗室教育訓練課程

近期儀器訓練課程:

  臨醫中心網頁報名 (https://crc.hosp.ncku.edu.tw/index.php?modify=course)

12月14日       全景組織體細胞定量分析儀實機操作示範與認證

  成大生醫光學影像核心平台 (https://bioimage.med.ncku.edu.tw/index.php?modify=course)

12月08日       倒立與水平對射式雙收光片層光顯微鏡(Light sheet)儀器說明課程

 

優秀論文分享 (依Impact Factor排序)